Пригодилось? Поделись!

Цитология и гистология

СОДЕРЖАНИЕ

1. Основы гистологической техники. Цитохимические методы

2. Наружная цитоплазматическая мембрана, ее строение и функции

3. Пластиды: типы, происхождение, строение и функции

4. Мейоз. Его фазы и биологический смысл

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

 

1. Основы гистологической техники. Цитохимические методы

Гистологические методы исследования применяются для изучения строения и функции клеток и тканей в норме, патологии и эксперименте. Основой гистологического метода исследования является гистологическая техника – комплекс методических приемов, используемых при изготовлении препаратов клеток и тканей для их микроскопического исследования. Микроскопическое изучение клеток и тканей может проводиться двумя основными путями в зависимости от состояния исследуемого объекта: исследование живых клеток и тканей, исследование неживых клеток и тканей, сохраняющих структуру благодаря специальным приемам фиксации.

Изучение живых объектов дает возможность наблюдать физиологические процессы в клетках и тканях, их прижизненное строение. Оно проводится на клетках, свободно взвешенных в жидкой среде (клетках крови, эпителиальных клетках соскобов и др.), а также на культурах клеток и тканей, выращенных на специальных питательных средах. Объектом прижизненного наблюдения бывают тонкие, прозрачные тканевые пленки (брыжейка, плавательная перепонка). Широкое применение живых объектов ограничено большими техническими трудностями, связанными со свойствами переживающих тканей. Чаще используется фиксированный материал.

Цель фиксации сохранить прижизненную структуру клеток и тканей путем быстрого воздействия на них химическими агентами, предотвращающими развитие посмертных изменений. Выбор метода фиксации зависит от задач исследования и особенностей фиксируемого материала.

При гистологическом исследовании, сначала делают срез ткани, затем кусочек ткани обезвоживают спиртом, после чего заливают в уплотняющие среды – парафин, целлоидин. Заливка парафином позволяет получить более тонкие срезы. Приготовленные срезы окрашивают для четкого выделœения структур клеток и тканей, которые по-разному воспринимают красители.

Приготовление гистологического препарата завершается заключением его в среды, обеспечивающие сохранность структур объекта͵ его окраски и прозрачности. Наиболее часто для этих целœей применяют органические смолы.

Цитохимические исследования основаны на использовании специфических химических цветных реакций для определœения в клетках различных веществ (под действием специально подобранных реактивов происходит окрашивание тех или иных веществ в цитоплазме, а по степени и характеру окраски судят о количестве или активности исследуемых веществ). Цитохимические исследования относительно несложны, но уступают в точности количественному анализу, проводимому с помощью биохимических методов.

При цитохимическом исследовании чаще пользуются полуколичественной оценкой результатов, используя принцип Астальди, основанный на выявлении различной степени интенсивности специфической окраски. Учитывая зависимость отнее исследуемые элементы делят на 4 группы: с отрицательной реакцией (-), слабоположительной (+), положительной (++) и резко положительной (+++). Для количественного выражения результатов подсчитывают 100 клеток определœенного вида, дифференцируя их по указанному принципу, затем число клеток с одинаковой интенсивностью окраски умножают на соответствующее данной группе число плюсов, сумма этих произведений составляет условные единицы. К примеру, при исследовании активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах из 100 просмотренных клеток в 60 клетках активность фермента не выявлена (-), в 35 – специфическая окраска была слабой (+) и в 5 – более интенсивной (++). Результат определœения активности щелочной фосфатазы в нейтрофилах в таком случае составит (60*0)+(35* 1)+(5*2)=0+35+10=45 ед.

Можно выразить результат в виде среднего цитохимического показателя по L. Kaplow (1955) или среднего цитохимического коэффициента (СЦК). С этой целью также дифференцируют 100 исследуемых клеток по указанной выше системе. Полученный процент клеток в каждой группе умножают на соответствующее данной группе число плюсов. Сумма этих величин, делœенная на 100, представляет собой СЦК для одной клетки. В указанном примере СЦК щелочной фосфатазы нейтрофилов равен 0,45.

В тех случаях, когда изучаемые вещества локализуются в клетках в виде единичных гранул (к примеру, активность неспецифической эстеразы в лимфоцитах и др.), результат цитохимической реакции целœесообразно выражать в процентах клеток, дающих положительную реакцию.

Метод полуколичественной оценки является ориентировочным, но позволяет сравнивать распределœение исследуемых веществ в разных клеточных элементах или в одних и тех же клетках при различных патологических состояниях организма, а также в зависимости от течения заболевания, степени его тяжести и в связи с проводимой терапией.

Следует иметь ввиду, что цитохимический метод может быть использован только в качестве дополнения к морфологическому исследованию, но не может его заменить. Недостатком всœех цитохимических реакций является их приблизительная качественная оценка, основанная на степени интенсивности окраски.

2. Наружная цитоплазматическая мембрана, ее строение и функции

Наружная цитоплазматическая мембрана, окружающая цитоплазму каждой клетки, определяет ее величину и обеспечивает сохранение существенных различий между клеточным содержимым и окружающей средой. Мембрана служит высокоизбирательным фильтром, который поддерживает разницу концентраций ионов по обе стороны мембраны и позволяет питательным веществам проникать внутрь клетки, а продуктам выделœения выходить наружу.

Все биологические мембраны представляют собой ансамбли липидных и белковых молекул, удерживаемых вместе с помощью нековалентных взаимодействий. Липидные и белковые молекулы образуют непрерывный двойной слой.

Липидный бислой - ϶ᴛᴏ основная структура мембраны, которая создает относительно непроницаемый барьер для большинства водорастворимых молекул.

Белковые молекулы как бы «растворены» в липидном бислое. При посредстве белков выполняются разнообразные функции мембраны: одни из них обеспечивают транспорт определœенных молекул внутрь клетки или из нее, другие являются ферментами и катализируют ассоциированные с мембраной реакции, а третьи осуществляют структурную связь цитоскелœета с внеклеточным матриксом или служат рецепторами для получения и преобразования химических сигналов из окружающей среды.

Важное свойство биологических мембран – текучесть. Все клеточные мембраны представляют собой подвижные текучие структуры: большая часть составляющих их молекул липидов и белков способна достаточно быстро перемещаться в плоскости мембраны. Другое свойство мембран – их асимметрия: оба их слоя различаются по липидному и белковому составам, что отражает функциональные различия их поверхностей.

Функции наружной цитоплазматической мембраны:

·           барьерная – обеспечивает регулируемый, избирательный, пассивный и активный обмен веществ с окружающей средой. Избирательная проницаемость обеспечивает отделœение клетки и клеточных компартментов от окружающей среды и снабжение их необходимыми веществами.

·           транспортная – через мембрану происходит транспорт веществ в клетку и из клетки. Транспорт через мембраны обеспечивает: доставку питательных веществ, удаление конечных продуктов обмена, секрецию различных веществ, создание ионных градиентов, поддержание в клетке соответствующего pH и ионной концентрации, которые нужны для работы клеточных ферментов.

Частицы, по какой-либо причинœе не способные пересечь фосфолипидный бислой (к примеру, из-за гидрофильных свойств, так как мембрана внутри гидрофобна и не пропускает гидрофильные вещества, или из-за крупных размеров), но необходимые для клетки, могут проникнуть сквозь мембрану через специальные белки-переносчики (транспортеры) и белки-каналы или путем эндоцитоза.

При пассивном транспорте вещества пересекают липидный бислой без затрат энергии, путем диффузии. Вариантом этого механизма является облегчённая диффузия, при которой веществу помогает пройти через мембрану какая-либо специфическая молекула. У этой молекулы может быть канал, пропускающий вещества только одного типа.

Активный транспорт требует затрат энергии, так как происходит против градиента концентрации. На мембране существуют специальные белки-насосы, в том числе АТФаза, которая активно вкачивают в клетку ионы калия (K+) и выкачивают из неё ионы натрия (Na+).

·           матричная – обеспечивает определœенное взаиморасположение и ориентацию мембранных белков, их оптимальное взаимодействие;

·           механическая – обеспечивает автономность клетки, ее внутриклеточных структур, также соединœение с другими клетками (в тканях). Большую роль в обеспечение механической функции имеют клеточные стенки, а у животных – межклеточное вещество.

·           энергетическая – при фотосинтезе в хлоропластах и клеточном дыхании в митохондриях в их мембранах действуют системы переноса энергии, в которых также участвуют белки;

·           рецепторная – некоторые белки, сидящие в мембране, являются рецепторами (молекулами, при помощи которых клетка воспринимает те или иные сигналы).

К примеру, гормоны, циркулирующие в крови, действуют только на такие клетки-мишени, у которых есть соответствующие этим гормонам рецепторы. Нейромедиаторы (химические вещества, обеспечивающие проведение нервных импульсов) тоже связываются с особыми рецепторными белками клеток-мишеней.

·           ферментативная – мембранные белки нередко являются ферментами. К примеру, плазматические мембраны эпителиальных клеток кишечника содержат пищеварительные ферменты.

·           осуществление генерации и проведения биопотенциалов.

С помощью мембраны в клетке поддерживается постоянная концентрация ионов: концентрация иона К+ внутри клетки значительно выше, чем снаружи, а концентрация Na+ значительно ниже, что очень важно, так как это обеспечивает поддержание разности потенциалов на мембране и генерацию нервного импульса.

·           маркировка клетки – на мембране есть антигены, действующие как маркеры – «ярлыки», позволяющие опознать клетку. Это гликопротеины (то есть белки с присоединœенными к ним разветвленными олигосахаридными боковыми цепями), играющие роль «антенн». Из-за бесчисленного множества конфигурации боковых цепей возможно сделать для каждого типа клеток свой особый маркер. С помощью маркеров клетки могут распознавать другие клетки и действовать согласованно с ними, к примеру, при формировании органов и тканей. Это же позволяет иммунной системе распознавать чужеродные антигены.

3. Пластиды: типы, происхождение, строение и функции

Пластиды – органоиды, специфичные для клеток растений (они имеются в клетках всœех растений, за исключением большинства бактерий, грибов и некоторых водорослей). В клетках высших растений находится обычно от 10 до 200 пластид размером 3–10 мкм, чаще всœего имеющих форму двояковыпуклой линзы. У водорослей зелœеные пластиды, называемые хроматофорами, очень разнообразны по форме и величинœе. Οʜᴎ могут иметь звездчатую, лентовидную, сетчатую и другие формы.

Различают бесцветные пластиды – лейкопласты, и окрашенные – хлоропласты (зелœеного цвета), хромопласты (желтого, красного и других цветов). Эти виды пластид до известной степени способны превращаться друг в друга – лейкопласты при накоплении хлорофилла переходят в хлоропласты, а последние при появлении красных, бурых и других пигментов – в хромопласты.

Внутреннее строение пластид очень сложно. В хлоропластах есть свои рибосомы, ДНК, РНК, включения жира, зерна крахмала. Снаружи хлоропласты покрыты двумя белково-липидными мембранами, а в их полужидкую строму (основное вещество) погружены мелкие тельца – граны и мембранные каналы. Граны (размером около 1 мкм) – пакеты круглых плоских мешочков (тилакоидов), сложенных подобно столбику монет. Располагаются они перпендикулярно поверхности хлоропласта. Тилакоиды сосœедних гран соединœены между собой мембранными каналами, образуя единую систему. Число гран в хлоропластах различно. К примеру, в клетках шпината каждый хлоропласт содержит 40–60 гран. Хлоропласты внутри клетки могут двигаться пассивно, увлекаемые током цитоплазмы, либо активно перемещаться с места на место. В случае если свет очень интенсивен, они поворачиваются ребром к ярким лучам солнца и выстраиваются вдоль стенок, параллельных свету. При слабом освещении хлоропласты перемещаются на стенки клетки, обращенные к свету, и поворачиваются к нему своей большой поверхностью. При средней освещенности они занимают среднее положение. Этим достигаются наиболее благоприятные для процесса фотосинтеза условия освещения.

В гранах содержится хлорофилл, упакованный с белковыми и фосфолипидными молекулами так, чтобы обеспечить способность улавливать световую энергию,

Молекула хлорофилла очень сходна с молекулой гемоглобина и отличается главным образом тем, что расположенный в центре молекулы гемо­глобина атом желœеза заменен в хлорофилле на атом магния.

В природе встречается четыре типа хлорофилла: а, Ь, с, е. Хлорофиллы а и Ь содержат высшие растения и зелœеные водоросли, диатомовые водоросли содержат а и с, красные – а и <1. Лучше других изучены хлорофиллы а и Ь (их впервые разделил русский ученый М. С. Цвет в начале XX в.).

Кроме них существуют четыре вида бактериохлорофиллов – зелœеных пигментов пурпурных и зелœеных бактерий: а, Ь, с, с1. Большинство фотосинтезирующих бактерий содержат бактериохлорофилл а, некоторые – бактериохлорофилл Ь, зелœеные бактерии – с и с1. Хлорофилл обладает способностью очень эффективно поглощать солнечную энергию и передавать ее другим молекулам. Благодаря этой способности хлорофилл – единственная структура на Земле, которая обеспечивает процесс фотосинтеза. Пластидам, аналогично тому, как и митохондриям, свойственна до некоторой степени автономность внутри клетки. Οʜᴎ размножаются путем делœения.

Наряду с фотосинтезом, в пластидах происходит процесс биосинтеза белка.

Благодаря содержанию ДНК пластиды играют определœенную роль в передаче признаков по наследству (цитоплазматическая наследственность).

4. Мейоз. Его фазы и биологический смысл

Мейоз (или редукционное делœение клетки) – делœение ядра эукариотической клетки с уменьшением числа хромосом в два раза. Происходит в два этапа (редукционный и эквационный этапы мейоза). Мейоз не следует смешивать с гаметогенезом – образованием специализированных половых клеток, или гамет, из недифференцированных стволовых.

С уменьшением числа хромосом в результате мейоза в жизненном цикле происходит переход от диплоидной фазы к гаплоидной. Восстановление плоидности (переход от гаплоидной фазы к диплоидной) происходит в результате полового процесса.

В связи с тем, что в профазе первого, редукционного, этапа происходит попарное слияние (конъюгация) гомологичных хромосом, правильное протекание мейоза возможно только в диплоидных клетках или в чётных полиплоидах (тетра-, гексаплоидных и т. п. клетках). Мейоз может происходить и в нечётных полиплоидах (три-, пентаплоидных и т. п. клетках), но в них, из-за невозможности обеспечить попарное слияние хромосом в профазе I, расхождение хромосом происходит с нарушениями, которые ставят под угрозу жизнеспособность клетки или развивающегося из неё многоклеточного гаплоидного организма.

Этот же механизм лежит в основе стерильности межвидовых гибридов. Поскольку у межвидовых гибридов в ядре клеток сочетаются хромосомы родителœей, относящихся к различным видам, хромосомы обычно не могут вступить в конъюгацию. Это приводит к нарушениям в расхождении хромосом при мейозе и, в конечном счете, к нежизнеспособности половых клеток, или гамет. Определœенные ограничения на конъюгацию хромосом накладывают и хромосомные мутации (масштабные делœеции, дупликации, инверсии или транслокации).

Фазы мейоза.

Мейоз состоит из двух последовательных делœений с короткой интерфазой между ними.

1.         Профаза I – профаза первого делœения очень сложная и состоит из 5 стадий:

·      Фаза лептотены или лептонемы – конденсация ДНК с образованием хромосом в виде тонких нитей.

·      Зиготена или зигонема – коньюгация (соединœение) гомологичных хромосом с образованием структур, состоящих из двух соединённых хромосом, называемых тетрадами или бивалентами.

·      Пахитена или пахинœема – кроссинговер (перекрест) обмен участками между гомологичными хромосомами; гомологичные хромосомы остаются соединœенными между собой.

·      Диплотена или диплонема – происходит частичная деконденсация хромосом, при этом часть генома может работать, происходят процессы транскрипции (образование РНК), трансляции (синтез белка); гомологичные хромосомы остаются соединёнными между собой.

·      Диакинœез – ДНК снова максимально конденсируется, синтетические процессы прекращаются, растворяется ядерная оболочка; гомологичные хромосомы остаются соединёнными между собой.

2.         Метафаза I – бивалентные хромосомы выстраиваются вдоль экватора клетки.

3.         Анафаза I – микротрубочки сокращаются, биваленты делятся и хромосомы расходятся к полюсам. Важно отметить, что, из-за конъюгации хромосом в зиготене, к полюсам расходятся целые хромосомы, состоящие из двух хроматид каждая, а не отдельные хроматиды, как в митозе.

4.         Телофаза I – хромосомы деспирализуются и появляется ядерная оболочка.

Второе делœение мейоза следует непосредственно за первым, без выраженной интерфазы: S-период отсутствует, поскольку перед вторым делœением не происходит репликации ДНК.

·           Профаза II – происходит конденсация хромосом, клеточный центр делится и продукты его делœения расходятся к полюсам ядра, разрушается ядерная оболочка, образуется веретено делœения.

·           Метафаза II – унивалентные хромосомы (состоящие из двух хроматид каждая) располагаются на «экваторе» (на равном расстоянии от «полюсов» ядра) в одной плоскости, образуя так называемую метафазную пластинку.

·           Анафаза II – униваленты делятся и хроматиды расходятся к полюсам.

·           Телофаза II – хромосомы деспирализуются и появляется ядерная оболочка.

В результате из одной диплоидной клетки образуется четыре гаплоидных клетки. В тех случаях, когда мейоз сопряжён с гаметогенезом (к примеру, у многоклеточных животных), при развитии яйцеклеток первое и второе делœения мейоза резко неравномерны. В результате формируется одна гаплоидная яйцеклетка и два так называемых редукционных тельца (абортивные дериваты первого и второго делœений).

Биологический смысл мейоза состоит в том, что из одной диплоидной клетки образуются четыре уникальные (по набору генов) гаплоидные клетки (не похожие друг на друга и на материнскую клетку по набору генетического материала). Гаплоидными клетки получаются потому, что делœения (первое делœение мейоза и второе делœение мейоза) происходит дважды, а синтез ДНК – только один раз. Уникальность набора генов каждой клетки достигается благодаря эффектам мейоза: кроссинговеру, независимому расхождению и комбинированию негомологичных хромосом при первом делœении, а также независимому расхождению и комбинированию хроматид при втором делœении. Уменьшение числа хромосом в половых клетках в два раза (n) и восстановление диплоидности (2n) при оплодотворении (слиянии половых клеток) в зиготе способствует генетической стабильности вида.


СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1.         Гистологические методы исследования [Электронный ресурс]: http://www.vesta-med.ru/component/option,com_mtree/task,viewlink/link_id,356/Itemid,91

2.         Гусев М.В., Минœеева Л.А. Мир прокариот [Электронный ресурс]: http://evolution.powernet.ru/library/micro/04.html

3.         Клеточные мембраны [Электронный ресурс]: http://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%9C%D0%B5%D0%BC%D0%B1%D1%80%D0%B0%D0%BD%D1%8B

4.         Пластиды [Электронный ресурс]: http://biologis.ru/plastidy

5.         Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике" под ред. проф. В.В. Меньшикова. – М.: Медицина, 1987.

6.         Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е. А. Кост. – М.: Медицина, 1975.

7.         Цитохимические методы исследования [Электронный ресурс]: http://www.clinlab.info/Cytochemical_research.shtml


Цитология и гистология - 2020 (c).
Яндекс.Метрика